細(xì)胞破壁的原理:
破壁后,細(xì)胞內(nèi)的水份油份遷出,使微粒子表面呈現(xiàn)出半濕潤(rùn)狀態(tài),粒子和粒子之間會(huì)形成穩(wěn)定的粒子團(tuán),每個(gè)粒子團(tuán)都包含相同比例的中藥成分。該粒子團(tuán)的物理結(jié)構(gòu)隨組份中各成分HLB值(親水,親油平衡值)、延展性、破碎性、比重等不同組合和不同的相互作用而不同,這種結(jié)構(gòu)有利于人體對(duì)中藥的吸收和利用。
細(xì)胞破壁的注意事項(xiàng):
1、確保具備足夠的初始材料,可以使用相同的試劑多次嘗試,因?yàn)榭赡苄枰{(diào)整條件。這對(duì)于利用酶法制備原生質(zhì)球尤為重要。
2、為了得到活的原生質(zhì)體,起始物質(zhì)應(yīng)該處于生命的全盛時(shí)期。所以選擇從幼嫩的植物組織開(kāi)始,或者在生長(zhǎng)的對(duì)數(shù)階段積極地進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。非常年輕的組織通常很小,他們更容易受到傷害,這增加了他們?cè)谔幚碇锌赡軣o(wú)法存活的幾率。另一方面,老的組織不容易再生,更容易感染。
3、在進(jìn)行任何處理前將細(xì)胞冷卻并保持是很重要的,保持細(xì)胞低溫可以減緩壞死。但保持細(xì)胞溫度高于冰點(diǎn)也是至關(guān)重要的,因?yàn)榧词故窃诮橘|(zhì)中短暫形成的冰晶也會(huì)損害細(xì)胞,減少產(chǎn)量。
4、原生質(zhì)球?qū)C(jī)械壓力和滲透壓非常敏感。為了防止它們破裂,需要維持等滲條件,這意味著細(xì)胞內(nèi)外的滲透壓應(yīng)該相等,滲透壓取決于鹽離子的濃度,不平等的壓力會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞破裂(低滲溶液)或內(nèi)爆(高滲溶液)。
5、即使是細(xì)胞的年齡和酶的批次之間的細(xì)微差別,也會(huì)形成不*的細(xì)胞壁消化和過(guò)度消化之間的對(duì)比,前者原生質(zhì)球產(chǎn)量為50%,后者導(dǎo)致大量死亡細(xì)胞。在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)中,不需要*移除細(xì)胞壁——部分移除細(xì)胞壁的原生質(zhì)球就可以了。